2018年3月13日南京傳奇生物科技有限公司的LCAR-B38M CAR-T自體回輸制劑臨床申請獲批，成為中國首個獲批的CAR-T療法。隨著新病毒載體系統(tǒng)的進一步開發(fā)，一些基于基因和細胞的療法距離獲得臨床批準和遺傳疾病治療的商業(yè)化應用又更進了一步。使用正確的瞬時轉染方法對病毒載體生產(chǎn)至關重要，以確保從工藝開發(fā)到高質量級別病毒載體生產(chǎn)的靈活性和可重復性。

法國Polyplus-transfection^?提供一系列基于PEI的高品質轉染試劑， 研發(fā)級PEIpro^?可用于工藝開發(fā)過程中建立病毒載體生產(chǎn)體系，臨床前級PEIpro^?-HQ和最高質量級別即完全GMP級別的PEIpro^?-GMP可用于臨床病毒載體的生產(chǎn)，滿足細胞治療和基因治療的質量要求。

PEIpro^?-GMP是最高質量級別的PEI，是市場上唯一提供帶有MPC連接器和焊接管的袋裝轉染試劑，非常適用于制造符合GMP標準的臨床級治療性病毒載體（如AAV和慢病毒）的封閉生產(chǎn)系統(tǒng)。使用PEIpro^?或PEIpro^?-HQ建立的大規(guī)模轉染方案可確保與PEIpro^?-GMP的無縫銜接，可用于制造治療性病毒載體和后期臨床試驗的商業(yè)化。

表1.Polyplus-transfection^?提供一系列不同級別PEIpro^?，滿足從工藝開發(fā)、臨床前、到臨床級別病毒載體的生產(chǎn)需求

圖1. 使用不同級別PEIpro^?，可重復獲得相似的病毒滴度

將懸浮液HEK-293T細胞以1×10 ⁶ cells/ mL的密度接種在FreeStyle^TM F17培養(yǎng)基中，并按照相同方案，分別用PEIpro^?，PEIpro^?-HQ和PEIpro^?-GMP試劑轉染。用Helper Free Packaging System（Cell Biolabs）生產(chǎn)AAV，轉染后72h，通過檢測GFP報告基因表達來檢測病毒滴度。

PEIpro^?系列產(chǎn)品優(yōu)勢多多，一起來扒一扒~

• 經(jīng)優(yōu)化的線性聚乙烯亞胺（PEI），毒性更低，轉染效率更高

圖2. PEI聚合物化學性質的優(yōu)化

由于長片段的PEI對細胞有毒性，而短片段PEI結合DNA能力較差（見紅色），所以優(yōu)化PEI的片段大小，降低其分散性能減少細胞毒性，同時增加結合DNA的能力（見藍色）和轉染重復性。

• 高滴度病毒生產(chǎn)的最佳選擇

表2. PEIpro^?是采用貼壁或懸浮細胞培養(yǎng)體系生產(chǎn)病毒的最佳選擇

不管細胞培養(yǎng)體系和生產(chǎn)規(guī)模如何， PEIpro^?和PEIpro^?-HQ 均可獲得較高的病毒產(chǎn)量，慢病毒的病毒滴度超過10⁷IG/mL，而AAV的病毒滴度超過10⁹ VG/mL。

• 與其它PEIs相比，PEIpro^?所需更少轉染試劑和較少/相似的DNA用量

圖3.與其它PEIs相比，PEIpro^?所需更少轉染試劑和較少/相似的DNA用量

懸浮HEK-293以1×10⁶cells/mL的密度接種在無血清培養(yǎng)基中，使用重懸后濃度為1 mg/mL的PEIpro^?、PEI “Max” 和L-PEI 25 kDa (Polysciences, Warrington, PA)進行轉染。采用常規(guī)熒光素酶測定法在轉染后48h測定熒光素酶的表達

• 與磷酸鈣相比能得到更高病毒滴度

圖4.PEIpro^?與磷酸鈣相比能得到更高的病毒滴度

無血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)HEK-293細胞，并產(chǎn)生慢病毒。每75 cm²燒瓶加入15 μg DNA和30 μl PEIpro^?，轉染48小時后，用流式細胞術檢測上清中的病毒滴度。

• 批次間有很好的穩(wěn)定性和可重復性

圖5.使用不同批次PEIpro?生產(chǎn)蛋白的得率具有極佳的重復性

懸浮HEK-293細胞以1×10⁶cells/mL 密度接種在無血清培養(yǎng)基中，按照PEIpro^?標準操作流程進行轉染。轉染48h后采用 protein G親和定量 (HPLC)法來檢測IgG3-Fc的產(chǎn)量。

產(chǎn)品信息

Polyplus-transfection^?，中文名保利嘉，是來自法國的一家專注核酸轉染的生物技術公司。因為專注所以專業(yè)，其產(chǎn)品適用于體內(nèi)和體外轉染，包括DNA、siRNA及其他寡核苷酸、蛋白和多肽轉染。高效率、低毒性、操作簡便和高性價比的產(chǎn)品受到廣大科研工作者喜愛，廣泛應用于基因功能研究、蛋白生產(chǎn)、病毒包裝和動物模型的構建。公司于2002年獲得ISO 9001證書。